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消滅細胞汙染

当清晨的阳光满照大地时,在細胞培養室的角落,倒置显微镜旁,总会聚集着几个孩纸,时不时的各种感慨。啊……細胞又長滿了!咦……細胞咋飄了好多?唉……這個細胞狀態好差,能不能長起來?完了完了,細胞汙染了……

 

各種細胞,總會有各樣問題讓人猝不及防。

 

虽说細胞培養是基础性的技术,但并不是每个人都能把每种细胞养的很好呢!

 

今天小编就来说说細胞培養室里细胞污染的事儿。

 

常見的細胞汙染除了來自其它細胞系的交叉汙染外,包括支原體、**、**汙染。這些微生物汙染對細胞産生的影響很大呢!例如,它們會與宿主細胞競爭營養;分泌酸性或堿性的副産物,使宿主細胞停止生長;産生對細胞直接有毒的H2O2等等。

 

有同學說,我使用了無菌的試劑和耗材,也遵循了無菌操作的要求,然而……還是莫名汙染了。隔壁的同學還沒有我做的仔細呢!

 

那麽,這種情形下,細胞到底爲什麽會汙染呢?細胞汙染要怎麽辦呢?

 

小编觉得此同学和彼同学,*大的差异恐怕是操作环境了。给大家提个醒,細胞培養室的环境控制尤为重要啦。

 

有這樣一篇文獻[1],作者对比了正常細胞培養室和污染培养室,在可能污染的位置放了血培养皿,根据微生物的生长状况,研究细胞污染的原因。以下是代表性的培养结果。

 

 

 

 

 

汙染物是毋庸置疑的源頭,培養室的空氣、培養箱內循環的空氣、培養箱的層架以及顯微鏡的載物台和物鏡都可能是汙染源。

 

其實,特別容易成爲汙染源的地方有這麽幾個:

 

1)空调(估计是細胞培養室没有做层流,也不经常清洗)。

2)生物安全櫃的空氣過濾系統。

3)生物安全櫃的進風口(如下圖黃線圈出的位置,操作不慎的話,很容易把培養基或者血清之類的東西滴進這個風口,裏面長個黴什麽的都是正常的,因爲你不會及時拆開清理)。

 

 

 

 

4)顯微鏡(一般也不會有人用84擦顯微鏡吧)

 

5)培养箱的水盘和複蘇細胞用的水浴锅(基本上是温床,但是可以在里面加入硫酸铜,并且周期性更换来避免长菌,但问题是硫酸铜会损伤不锈钢)。

6)離心機(也是重災區)。

7)液氮罐(這個估計大家都不會注意的,但好在液氮罐汙染可能性比較低)。

 

如果出現細胞汙染的情況,勸你直接加入84,灭活以后丢弃。万一不幸,**肆虐,細胞培養室还要用甲醛熏蒸。

 

但是,你的細胞特別珍貴,汙染了,怎麽辦?那就要用***了!

 

1)、*常用:青黴素、鏈黴素聯合抑制**,即所謂的“雙抗”,主要針對革蘭氏陽性菌、陰性菌;對于**的感染也可用慶大或卡那黴素;


2)、如果**汙染嚴重,可用兩性黴素/制黴菌素控制;


3)、若爲支原體汙染,可用慶大黴素/四環素/紅黴素;

 

注意,抑制**的***,對細胞都有比較大的傷害。使用前,一般都建議先做預實驗,估計對細胞本身的影響。

本次的細胞培養就写到这里。关于細胞培養更多的故事,請後續關注~

 

今天,你的細胞還好麽?

 

 

 

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